Иммуноферментный анализ

Иммуноферментный анализ, ИФА (от лат. immunitas — освобождение, избавление от чего-либо и fermentum — закваска) — это базовый метод лабораторной серологической диагностики, основанный на специфической реакции связывания антигена с антителом.

В отличие от ПЦР, который выявляет генетический материал вируса, ИФА чаще всего используется для обнаружения иммунного следа (антител), который вирус оставил в организме пациента.

Этиология и патофизиология

В основе метода лежит принцип молекулярного распознавания «ключ-замок». Диагностический процесс состоит из следующих этапов:

1. на дно лунок специального пластикового планшета производитель заранее наносит очищенные антигены интересующего вируса (например, вируса кори);
2. туда добавляется сыворотка крови пациента (если человек болен или переболел корью, в его крови есть антитела, которые прочно связываются с антигенами на дне лунки);
3. чтобы визуализировать этот процесс, в лунку добавляют вторичные антитела, к которым химически пришит фермент; они связываются с уже образовавшимся комплексом;
4. на последнем этапе заливается субстрат-проявитель.

Фермент расщепляет субстрат, изменяя окраску жидкости в лунке. Чем интенсивнее окраска (оптическая плотность), тем выше концентрация (титр) антител в крови пациента.

Клиническое значение

ИФА — главный инструмент для определения стадии инфекционного процесса. Он позволяет врачу не только подтвердить контакт пациента с инфекцией, но и разделить антитела по классам (IgM, IgG, IgA), а также определить их авидность (силу связывания).

Именно методом ИФА проводится:

• скрининг донорской крови — на ВИЧ, гепатиты и сифилис;
• тестирование беременных женщин (TORCH-комплекс) — для оценки риска внутриутробного инфицирования плода.

Если ИФА дает положительный результат на антитела к новой инфекции, диагноз часто требует подтверждения более сложными методами (например, иммуноблоттингом или ПЦР).