Ensaio imunoenzimático

O ensaio imunoenzimático, ELISA (do latim immunitas — liberação, isenção de algo, e fermentum — fermento) é um método básico de diagnóstico sorológico laboratorial, baseado na reação específica de ligação do antígeno ao anticorpo.

Ao contrário da PCR, que detecta o material genético do vírus, o ELISA é mais frequentemente utilizado para detectar o vestígio imunológico (anticorpos) deixado pelo vírus no organismo do paciente.

Etiologia e fisiopatologia

O método baseia-se no princípio de reconhecimento molecular «chave-fechadura». O processo diagnóstico consiste nas seguintes etapas:

1. o fabricante aplica previamente antígenos purificados do vírus de interesse (por exemplo, o vírus do sarampo) no fundo dos poços de uma microplaca plástica específica;
2. adiciona-se o soro sanguíneo do paciente (se a pessoa estiver com sarampo ou já o tiver tido, há anticorpos em seu sangue que se ligam firmemente aos antígenos no fundo do poço);
3. para visualizar esse processo, adicionam-se ao poço anticorpos secundários aos quais uma enzima está quimicamente conjugada; eles se ligam ao complexo já formado;
4. na etapa final, adiciona-se o substrato revelador.

A enzima cliva o substrato, alterando a coloração do líquido no poço. Quanto mais intensa a coloração (densidade óptica), maior a concentração (título) de anticorpos no sangue do paciente.

Importância clínica

O ELISA é o principal instrumento para determinar o estágio do processo infeccioso. Ele permite ao médico não apenas confirmar o contato do paciente com a infecção, mas também classificar os anticorpos por classes (IgM, IgG, IgA), bem como determinar sua avidez (força de ligação).

O método ELISA é utilizado para realizar:

• triagem de sangue de doadores — para HIV, hepatites e sífilis;
• testagem de gestantes (painel TORCH) — para avaliar o risco de infecção intrauterina do feto.

Se o ELISA apresentar resultado positivo para anticorpos contra uma nova infecção, o diagnóstico frequentemente requer confirmação por métodos mais complexos (por exemplo, imunoblotting ou PCR).